SC∕T 7233-2020 急性肝胰腺坏死病诊断规程(水产)
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ID： |
6BD28995BD1A4DA2B8BBFF75F6BD3100 |
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文件大小(MB)： |
0.62 |
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页数： |
15 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-24 |
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ICS 65.020.30,B 41 ←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7233一2020,急性肝膜腺坏死病诊断规程,Code of diagnosis for acute hepatopancreatic necrosis disease,2020-08-26 发布2021-01-01 实施,气缸中华人民共和国农业农村部发布,SC/T 7233-2020,I,SC/T 7233-2020,急性肝腰腺坏死病诊断规程,1 范围,本标准给出了急性肝膜腺坏死病诊断(acute hepatopancreatic necrosis disease , A HPND ) 的术语和,定义、缩略语、试剂和材料、器材和设备、临床症状，规定了采样、组织病理学检测、分子生物学检测、菌种鉴,定和综合判定,本标准适用于致急性肝",V户AHPND ) 引起的对虾急,3,4,SPF : 元特定病原体(speci fic,Taq 酶 水生栖热菌DNA 聚合酶(Therm古'm帽"πsDNA polymerase),VAHPi咽: 致急性肝膜腺坏死病弧菌(A HPND-caus i ng Vibrio spp. ),5 试剂和材料,5. 1 除非另有说明，标准中使用的水为蒸饱水、去离子水或相当纯度的水,5.2 二甲苯: 分析纯,5 3 中性树胶,5. 4 DAFA 固定液: 见附录A 中的A. l.,5.5 苏木精染色液. 见A.2 0,5.6 1 %伊红储存液:见A . 3 0,SC/T 7233- 2020,5.7 1 %焰红储存液: 见A. 4 ,5 8 伊红-焰红染色液:见A . 5 0,5 9 粘片JliJ : 见A.6 ,5. 10 95 % 乙醇- 分析纯@,5. 11 85% 乙醇.见A.7 ,5. 12 80% 乙醇: 见A.8 0,5. 13 7 5% 乙醇 见A.9 ,5. 14 70 % 乙醇: 见A.1 0 0,5. 15 50% 乙醇: 见A.11 o,5 16 组织病理学检测阳性对照为受V户AHP~'D感染且显示明显病理变化的对虾肝膜腺组织切片,5. 17 组织病理学检测阴性对照为未受Vp AHI'ND感染的健康对虾肝膝腺组织切片,5. 18 dNTPs( 各2 . 5 mmo l/U ，含dATP 、dTTP ， dGTP 、dCTP 各2 . 5 mmo l/ L 的混合物， 一20.C,保存,5. 19 10 X PCR 缓冲液，无MgZ\- 20.C保存.,5. 20 MgClz (25 mmo l/ U ， 一20.C 保存,5. 21 T叫， 酶(5 U/μL) ， 一20.C保存,5. 22 分子生物学检测阳性对照为已知受V户AHJ>ND感染的对虾肝膜腺组织、DNA ，或VT AJ-II'ND菌液DNA ,或含有户irA叩、户irB叩基因的质粒DNA ， -20.C 以下保存,523 分子生物学检测阴性对照为SPF 对虾组织DNA ， - 20.C 以下保存,5. 24 分子生物学检测空白对照为灭菌双蒸水.,5. 25 50 X 电泳缓冲液见A. 1 2 .,5. 26 1 X 电泳缓冲液.见A.13 .,5.27 6 X 载样缓冲液,528 琼脂粉,5. 29 DNA 分子盘标准,5 30 琼脂糖凝胶电泳核酸染料及其他等效产品,6 器材和设备,6 1 切片机,6 2 组织脱水机,6 3 包埋机,6. 4 染色机,6 5 展片水浴锅.,6. 6 平板烘片机.,6. 7 显微镜,6. 8 PCR 仪,6. 9 电泳仪,6 10 水平电泳梢,6. 11 紫外观察仪或凝胶成像仪,6. 12 荧光定盘PCR 仪,6 13 高速离心机,2,6. 14 微量移液器,7 临床症状,SC/T 7233-2020,患病对虾甲壳发软，空肠空胃或肠道内食物不连续，肝胶腺色浅发白， 萎缩变小，表面常见黑色斑点和,条纹，不易用手指捏破。参见附录Bo,B 采样,8. 1 采样对象,凡纳滨对虾(Litopenaeus val1 llamei) 和斑节对虾CPenaeus mOl1odon) 等易感品种，优先选择濒死虾或,具有临床症状的对虾。参见附录Bo,8. 2 采样数量、方法和保存运输,应符合GB/ T 28630. 4-2012 中附录B 的要求,8. 3 样品采集,8. 3. 1 组织病理学检测的样本，选取肝腋j尿， 快速浸入DAFA 固定液中固定.2 4 h 后换人70 % 乙醇中长,期保存,8. 3. 2 分子生物学检测的组织样本， 选取肝腕腺、胃、中肠及后肠。亲虾的非致死检测取粪便。所取样品,立即进行DNA 提取，或暂存于95% 乙酶中，或保存于20 0C 。采样时，稍大的虾取个体检测， 仔虾或未达,到0 . 5 g 的样品可合并样本,8. 3. 3 对于细菌分离的样品，用无菌牙签从肝膜腺或胃部部取微量液体，按GB 4789. 7 进行分离和增菌,培养,9 组织病理学检测l,9 1 操作方式,使用6 . 1 - 6 . 6 中设备或手动操作完成,9. 2 修块,样品切片前的取材修整，应符合GB/T 28630. 4-2012 中附录B 的要求，保证病灶部位能被有效地,切片,9 3 脱水,75% 乙蹲(1 h 45 m i n)→85 % 乙醇(1 h 45 mi n)→85% 乙醇(1 h 45 m i n)→95% 乙酶(45 min)?95%,乙醇(45 min)→无水乙醇(45 m i n)→无水乙醇(45 m i n) ,9.4 透明,无水乙E事: 二甲苯(1……
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